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技术导航 | PCR实验室建设要求及防控建议

   日期:2020-11-12     来源:现代实验室装备网    浏览:998    
核心提示:聚合酶链锁反应,简称PCR,是一种分子生物学技术,用于扩增特定的DNA片段,这种方法可在生物体外进行,不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。
 

小代君说

聚合酶链锁反应,Polymerase chain reaction,简称PCR,是一种分子生物学技术,用于扩增特定的DNA片段,这种方法可在生物体外进行,不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。PCR这项技术,被广泛地运用在医学和生物学的实验室,例如用于判断检体中是否会表现 某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制,以及亲子鉴定。

Part 01

PCR实验室平面布局

PCR实验室原则上分为4个单独的工作区域,由扩增前区到扩增后区,且要严格分开。实验材料、试剂、记录笔、纸、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂制备区--样品制备区---扩增区---扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流动到扩增后区,不得逆向流动。各工作区域应设置缓冲间,工作间与缓冲间之间宜安装联锁装置。不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室,并有明显的标志,各区间不能直通。各区之间如果是紧密相连,需安装物品 传递窗。每个工作区域的顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm。


实验室较为理想的布局模式为有一个专用走廊,试剂制备区,样品制备区,扩增区和产物分析区很规范的排列在一起。内实验室区域设为正压或常压状态,缓冲间内设为负压状态,使这三个区的空气流向由实验区域内向外,缓冲间内通向内实验室和走廊的门可安一种联锁装置,当一个门打开时,另一门必须关闭状态,防止出现两个门同时打开的情况。


Part 02

各区的功能及主要设备

1​.试剂制备区主要是扩增试剂的配制,分装盒保存。主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、紫外灯。


2.样品制备区主要是样品的混样和测试样品的制备。主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器、紫外灯。根据制备样品的性质和要求决定操作台是用生物安全柜、净化工作台、还是排毒柜,如疾控中心、临床医学实验室一般选用生物安全柜,植物转基因、检疫等可选排毒柜。


3.扩增区是pcr扩增反应体系的配制和模板的加入,核酸扩增。加样应在生物安全柜(超净工作台)内进行,超净工作台的气流方向宜选择垂直式。核酸扩增设备为冰箱、生物安全柜、离心机加样器、废弃物容器、紫外灯。


4.扩增产物分析区是扩增产物的测定。若实验仅采用全自动扩增检测仪,可将 区与扩增产物分析区合并为一个区。本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。

Part 03

实验室空调通风系统设计及压力控制

各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验室之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为了避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送排的气流组织形式。

Part 04

实验室装修

实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用弧形线条过滤;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。地面建议使用PVC卷材地面或自流平地面,整体性好,便于进行清扫,耐腐蚀。


 

 
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